KOD DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 聚合酶

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起订量单价2500U（10支）256元/支25000U(100支）128元/支150000U 0.3元/UKOD DNA Polymerase（高保真，高扩增效率）

概述：

本酶是从鹿儿岛县小宝岛的含硫气孔中分离出来的超嗜热原始菌Thermococcus kodakaraensis KOD1来源的KOD DNA polymerase。具有很强的3'→5'核酸外切酶活性(校正活性)，保真性约为Taq DNA Polymerase的50倍。

活性定义：

75℃活性测定条件下，在30min内摄入10nmoles的dNTPs使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。

用途：

PCR，尤其用于PCR产物的克隆DNA片段的平滑化

特点：

具有强有力的3'—5'核酸外切酶活性，比Taq DNA Polymerase准确性高50倍，是PCR克隆的选择。快捷的DNA合成速度，扩增延伸速度为1Kb/30秒(约为Taq的2倍)！优良的耐热性，对处理GC-rich模板等具有特异性高级结构的目的片段非常有利。同时可加入终浓度2-5%的DMSO，有利于改善扩增效果。

基本反应条件

成分量KOD DNA Polymerase2.5 U10×PCR buffer 15 μl模板1-50 ng（质粒）

10-1000ng（基因组）引物（10uM）1 μldNTPs0.2 mMTotal50 μl

循环（1） 循环（2） 循环（3）

98℃1min 98℃1min 98℃1min

98℃15s 98℃ 15s 98℃15s

Tm 5s Tm 30s 68℃40s/kb

74℃30s/1kb 74℃ 30s/kb

25-35cycles 25-35cycles 25-35cycles

一般情况下使用buffer1，片段大于4kb或者扩增拖带时建议使用buffer2。该酶不适合于长距离PCR。长距离PCR扩增时建议使用我公司KOD Dash。所配buffer中已含有12mMMg2+。如果在循环（1）条件无法扩增，可使用循环（2）条件，如果发现有拖尾效应时，可使用循环（3）条件，一般经过这些改变反应结果会有所改善。

10×PCR buffer1：

1.2MTris-HCl（pH8.0）100mMKCl60mM (NH4)2SO412mM MgCl21% TritonX-100100μg/ml BSA

10×PCR buffer2：

1.2MTris-HCl（pH8.8）100mMKCl60mM (NH4)2SO412mM MgCl21% TritonX-100100μg/ml BSA

Storage buffer：

50mMTris-HCl（pH8.0）0.1mMEDTA50mM KCl1mM DTT 0.1%Tween-200.1% NP-40 50% Glycerol

几点建议：

PCR产物的克隆：

该酶的PCR产物可以通过平滑末端克隆法进行克隆。此时若载体已进行了脱磷酸化处理，则可对PCR产物进行磷酸化处理，或者采用带5’磷酸基的引物。

PCR条件的设定：

扩增延伸速度为1Kb/30秒，延伸时间过长，有时会有拖尾效应。如出现拖尾效应，可缩短延伸时间或者减少酶量。

由于该酶的耐热性好，在应用于GC含量高的模板等以及易产生高级结构的模板时，可在96℃以上进行变性。

引物的设计：

建议将引物设计得比使用Taq酶时的要相对长一些为佳。使用Tm值高的引物时，可以进行循环（3）的建议PCR反应。另外采用3’端有错配碱基的引物时，该酶有时会得到纠正。

程序设定：

延伸速度：30s/kb 延伸温度：74℃